凋亡相關因子ELISA試劑盒是一種基于酶聯免疫吸附測定原理,用于定量檢測細胞或組織樣本中與細胞凋亡(程序性死亡)密切相關的關鍵蛋白因子的高靈敏度體外診斷工具。常見的檢測靶標包括Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2、Fas、FasL、Cytochrome C、p53、Annexin V等,這些因子在內源性(線粒體)或外源性(死亡受體)凋亡通路中發揮核心調控作用。
該試劑盒通常采用雙抗體夾心法或競爭法設計,包含預包被特異性捕獲抗體的微孔板、標準品、生物素標記檢測抗體、酶結合物(如HRP標記)、顯色底物及終止液等組分。實驗操作簡便,僅需將待測樣本(如細胞裂解液、血清、血漿或組織勻漿)加入微孔板中,經孵育、洗滌、顯色和酶標儀讀數等步驟,即可通過標準曲線精確計算目標蛋白的濃度。其檢測靈敏度可達pg/mL級別,具有高特異性、良好重復性和寬動態范圍。
1、整體保存條件
未開封試劑盒:需在2-8℃環境中冷藏保存,避免冷凍,通常有效期為6個月(具體以試劑盒標簽標注為準)。
開封后試劑盒:
包被微孔板:若未用完,應裝入帶有干燥劑的密封袋中,放回2-8℃冰箱保存。
剩余試劑:建議s次實驗后1個月內使用完畢,并嚴格按標簽溫度保存(如標準品、檢測溶液等需-20℃保存)。
2、特殊成分保存要求
含酶類成分(如末端脫氧核苷酸轉移酶TdT):需貼近2℃儲存,以最大限度保持活性。
熒光標記物或化學發光底物(如FITC、PE、TMB):需避光保存,建議用鋁箔包裹或棕色瓶存放,防止光漂白導致信號減弱。
含甘油或酶標抗體的組分:嚴禁冷凍,避免蛋白變性。
3、分裝與防反復凍融
頻繁使用試劑:建議按單次用量分裝至0.5mL離心管,用封口膜密封后置于-20℃避光保存。分裝前需對工作臺紫外線消毒,操作全程佩戴低溫防護手套。
解凍要求:使用前需梯度解凍(如4℃冰箱解凍12小時),禁止室溫快速解凍。解凍后試劑需在24小時內使用完畢,未用完部分應廢棄。
4、濕度控制
高濕度環境:可能導致凍干粉劑吸潮結塊或溶液滋生微生物。建議在試劑盒內放置變色硅膠干燥劑,當指示劑由藍變粉時需立即更換。
已開封試劑瓶:每次用完后應立即封口,并于干燥器中暫存。
5、運輸與異常處理
冷鏈運輸:需配備冰袋維持低溫,避免劇烈震動導致液體溢出。接收時應檢查包裝完整性,若有破損需隔離可疑試劑。
停電或超溫:若發生停電導致超溫,普通緩沖液可繼續使用,但酶類制劑需經活性檢測合格后方可投入實驗(如取1μL酶標物加入99μL底物緩沖液,37℃孵育10分鐘后測定A405nm值,活性保留率>85%方可使用)。
6、標簽與記錄管理
標簽更新:收貨時標注開箱日期,并在試劑管表面加貼實際啟用日期標簽。多數試劑開封后穩定性顯著下降,需參照說明書縮短使用周期。
質量驗證:定期進行陽性對照檢測(如加入已知凋亡誘導劑的處理組),通過流式細胞術檢測凋亡峰比例變化,量化評估試劑靈敏度變化趨勢。
